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【全文阅读】:乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2全基因组序列测定及基因遗传稳定性

乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2全基因组序列测定及基因遗传稳定性

  • 《微生物学免疫学进展》
  • 发表时间:2017年1期
  • 黄敏,袁良玉,吕冰凌,潘海龙,卓金蓉
  • 成都生物制品研究所有限责任公司质量检定室

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文章简介

目的 对乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2株进行全基因组序列测定和分析,并观察该生产株在疫苗制备过程中的基因遗传稳定性。方法 根据DNA序列数据库(Gen Bank)公布的SA14-14-2株的序列,设计合成7对引物,提取疫苗生产株SA14-14-2及其工作种子批生产的3批原液、3批成品疫苗的病毒RNA,通过RT-PCR方法扩增SA14-14-2株的c DNA片段,分别克隆到p GEM-T载体,转化至大肠埃希菌DH5α中,挑取阳性菌落克隆、鉴定后测定全序列并对序列进行比较分析,观察毒株在传代的过程中病毒滴度的稳定性。结果 乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2株基因组全长10 976bp,编码3 433个氨基酸。3批原液和3批成品疫苗的基因组全长为10 977bp,比较分析发现,在3’端非编码区10 701处多一个G核苷酸的插入。与DNA序列数据库(Genbank)登录号为D90195的全长序列同源性分别是99.9%、99.9%、99.9%、99.9%、99.8%、99.9%、99.8%,其中E蛋白的同源性均为100%。SA14-14-2生产株的病毒滴度为7.22 lg PFU/m L,原液和成品疫苗的滴度分别为7.32、7.23、7.32、6.86、6.92、6.70lg PFU/m L。结论 乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2基因稳定,具有良好的一致性,为乙型脑炎减毒活疫苗的质量的稳定性提供了可靠依据

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